Kalceín AM bunka životaschopnosť test súprava

 

Názov produktu	Cat. Nie	Špec.
Calcein AM Cell Viability Assay Kit (CCK-F)	G1609-100T	100T
	G1609-500T	500T

 

 

Calcein AM je založený na Calceine (Calcein Acetoxymethyl Ester) a zavádza acetylmetoxymetylesterovú (AM) skupinu, ktorá nielen maskuje molekulárnu časť kalceínu, ktorá chelátuje vápnik, ale tiež zvyšuje jeho hydrofóbnosť, čím umožňuje Calceinu AM ľahko preniknúť do membrány. živých buniek a aby boli strihané endogénnymi bunkovými esterázami na kalceín. Kalceín, ktorý stratil svoju AM skupinu, nemôže ľahko prejsť cez bunkovú membránu, a tak sa zadržiava vo vnútri bunky; okrem toho je čiastočne odkrytá molekulárna časť chelátovaného vápnika, čo umožňuje kalceínovej sonde viazať sa na ióny vápnika v živej bunke a vyžarovať silnú zelenú fluorescenciu. Mŕtvym bunkám však chýba esteráza a nemôžu byť hydrolyzované na Calcein AM, takže nemôžu označiť mŕtve bunky. Calcein AM má nízku cytotoxicitu a má malý vplyv na bunkové funkcie, ako je bunková proliferácia alebo chemotaxia lymfocytov, čo z neho robí vynikajúcu fluorescenčnú sondu na farbenie živých buniek.

 

Tento produkt, Calcein AM Cell Activity Assay Kit, tiež známy ako Cell Fluorescence Counting Kit (CCK-F), je testovacia súprava na vyhodnotenie aktivity, toxicity a proliferácie buniek označením živých buniek fluorescenčnou sondou Calcein AM. Táto súprava bola optimalizovaná a vyladená, má nielen vysokú citlivosť detekcie a široký lineárny rozsah, ale tiež vyžaduje len krátky inkubačný čas na dokončenie detekcie buniek. Je ľahko ovládateľný a nevyžaduje značenie rádioizotopmi alebo kroky, ako je kryštalizácia a rozpúšťanie, čo môže znížiť chyby spôsobené experimentálnymi operáciami a zlepšiť presnosť a reprodukovateľnosť.

 

 

Loď s mokrým ľadom; skladujte pri -20 stupňoch v tme.; Snažte sa vyhnúť opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu, platí 12 mesiacov.

 

 

Číslo komponentu	Komponent	G1609-100T	G1609-500T
G1609-1	Calcein AM roztok	100 μL	500 μL
G1609-2	Skúšobný pufor CCK-F	10 ml	50 ml
manuál		Jedna kópia

 

 

1. Príprava pracovného roztoku Calcein AM

Pre 96-jamkovú doštičku na kultiváciu buniek použite 100 ul pracovného roztoku kalceínu AM na jamku. Pripravte primerané množstvo pracovného roztoku kalceínu AM, ako je uvedené v nasledujúcej tabuľke, a dôkladne premiešajte.

 

Komponent	10 testov	50 testov	100 testov
Calcein AM roztok	10 μL	50 μL	100 μL
Skúšobný pufor CCK-F	1 ml	5 ml	10 ml

 

2. Detekcia adherovaných buniek:

Nasledujúce kroky zodpovedajú 96-detekčnej schéme doštičiek s jamkami a ďalšie systémy doštičiek s viacerými jamkami je potrebné upraviť podľa situácie.

a. Výsadba buniek: bunky sa rovnomerne naočkujú do 96-jamkovej platne v určitej hustote a ošetria sa liekmi alebo inými predbežnými úpravami (hustota výsevu je určená faktormi, ako je veľkosť buniek, rýchlosť rastu atď.);

b. (Voliteľné) Premývanie buniek: Odstráňte kultivačné médium a premyte bunky raz až dvakrát PBS (odporúča sa G4202), aby ste odstránili sérum, fenolovú červeň a/alebo lieky, ktoré interferujú s testom.

c. Značenie sondy: Po odstránení bunkového kultivačného média alebo pufra PBS pridajte 100 μl pracovného roztoku kalceínu AM a inkubujte pri 37 stupňoch 30 minút v tme.

d. (Voliteľné) Bunková inkubácia: Pokračujte v inkubácii 15-30 min s novým bunkovým kultivačným médiom, aby ste sa uistili, že intracelulárny Calcein AM je úplne hydrolyzovaný.

e. Detekcia fluorescencie: Po inkubácii zmerajte fluorescenciu pomocou čítačky fluorescenčných mikrodoštičiek (maximálna excitačná vlnová dĺžka sondy Calcein AM je 501 nm a maximálna vlnová dĺžka emisie je 521 nm) a vypočítajte životaschopnosť buniek. Intenzita fluorescencie je úmerná počtu životaschopných buniek. Na pozorovanie výsledkov farbenia možno použiť aj fluorescenčnú mikroskopiu.

3. Test suspenzných buniek:

a. Výsadba buniek: bunky sa rovnomerne naočkujú do 24-jamkovej platne pri určitej hustote a ošetria sa liekmi alebo inými predbežnými úpravami (hustota výsevu je určená faktormi, ako je veľkosť buniek, rýchlosť rastu atď.);

b. (Voliteľné) Premytie buniek: Odstreďte bunkovú kultúru pri 1,{1}}×g počas 3-5 minút, odstráňte supernatant a premyte bunky dvakrát PBS, aby ste odstránili sérum, fenolovú červeň a/alebo lieky, ktoré interferujú s test.

c. Značenie sondy: Po odstredení pri 1000 g počas 3-5 min odstráňte kultivačné médium pre bunky alebo pufor PBS, pridajte vhodné množstvo pracovného roztoku Calcein AM a inkubujte pri 37 stupňoch 30 minút v tme;

d. (Voliteľné) Bunková inkubácia: Pokračujte v inkubácii 15-30 min s novým bunkovým kultivačným médiom, aby ste sa uistili, že intracelulárny Calcein AM je úplne hydrolyzovaný.

e. Detekcia fluorescencie: Po inkubácii zmerajte fluorescenciu čítačkou fluorescenčných mikrodoštičiek alebo prietokovou cytometriou (maximálna excitačná vlnová dĺžka sondy Calcein AM je 501 nm a maximálna vlnová dĺžka emisie je 521 nm). Životaschopnosť buniek je úmerná intenzite fluorescencie. V závislosti od účelu experimentu môžu byť jadrá ďalej farbené alebo detegované inými prístrojmi, ako je fluorescenčná mikroskopia.

 

 

1. Pred použitím roztok Calcein AM krátko odstreďte, aby ste znížili straty činidla.

2. Calcein AM sa vo vlhkom prostredí ľahko rozkladá. Po prijatí alikvóty pevne uzavrite a skladujte pri -20 stupňoch .

3. Calcein AM je nestabilný vo vodných roztokoch. Pracovný roztok Calcein AM je pripravený na použitie a použiteľný do 24 hodín.

4. Optimálny inkubačný čas je odlišný pre rôzne typy buniek, ktorý je možné upraviť a optimalizovať na základe výsledkov farbenia.

5. Ak sa na meranie používa fluorescenčná čítačka mikrodoštičiek, na pestovanie buniek použite čiernu viacjamkovú doštičku.

6. Fluorescenčné farbivá podliehajú rýchlemu ochladzovaniu, manipulujte s nimi a skladujte ich mimo dosahu svetla.

7. Pre vašu bezpečnosť a zdravie noste bezpečnostné okuliare, rukavice alebo ochranný odev.

 

Len na výskumné účely!

 

 

Populárne Tagy: Súprava na test životaschopnosti buniek calcein am, Čína výrobcovia súpravy na testovanie životaschopnosti buniek calcein am, dodávatelia, továreň