Exozómový koncentračný roztok

Exozómy sú nanorozmerové membránové vezikuly jednotnej veľkosti, s veľkosťou častíc v rozmedzí od 30 do 150 nm, aktívne vylučované bunkami do extracelulárneho priestoru. Táto vezikula má svoj vlastný špecifický biomarker a obsahuje proteíny, mRNA, miRNA, lipidy a ďalšie látky, ktoré sa môžu podieľať na procese bunkového rastu, proliferácie, diferenciácie, migrácie, angiogenézy a rastu nádoru prostredníctvom medzibunkového materiálu a signálnej komunikácie.

Tento produkt je bežný koncentrovaný roztok Exozómov, ktorý dokáže rýchlo získať veľké množstvo kompletných Exozómových častíc z tekutých biologických vzoriek, ako je bunkový supernatant a zvieracie sérum.

Preprava pri izbovej teplote; Skladujte pri izbovej teplote s dobou použiteľnosti 12 mesiacov.

1. Predúprava vzorky:

a) Biologické vzorky s nízkym obsahom exozómov (s použitím "bunkového supernatantu" ako príkladu): Vezmite bunkový supernatant, centrifugujte pri 4 stupňoch, 3000×g počas 10 minút, aby ste odstránili bunkové zvyšky; Supernatant znova centrifugujte pri 4 stupňoch a 10 000 x g počas 20 minút. Potom prefiltrujte supernatant pomocou 0,22 μm filtračnej membrány a vyčistite ho na neskoršie použitie.

b) Biologické vzorky s vysokým obsahom exozómov (ako príklad sa používa „Zvieracie sérum“): Vezmite zvieracie sérum, odstreďte ho pri 4 stupňoch, 3000×g po dobu 10 minút v päsť; Potom centrifugujte supernatant pri 4 stupňoch a 10 000 x g počas 20 minút. Nakoniec prefiltrujte supernatant pomocou 0,22 μm filtračnej membrány. Po predbežnej purifikácii zrieďte zvieracie sérum v pomere 1:9 až 1 x objem PBS na neskoršie použitie.

2. Exozómová koncentrácia:

a) Vezmite spracovanú biologickú vzorku a zmiešajte ju s rovnakým objemom koncentrátu exozómov. Po intenzívnej vírivej oscilácii po dobu 15 s-60 s ju nechajte stáť 2 hodiny pri 4 stupňoch v chladničke (voliteľné: oscilácia vírivky každých 30 minút počas stacionárneho obdobia).

b) Umiestnite zmiešaný roztok do centrifúgy, centrifugujte pri 4 stupňoch a 10 000 x g počas 60 minút; Zlikvidujte supernatant.

c) Pridajte vopred vychladený pufor PBS v pomere 1 x objem PBS=100:1 podľa objemu koncentrátu exozómov a resuspendujte a odstred'ujte na vyzrážanie (poznámka: toto je ekvivalentné 100× koncentrácii a rozdielne objemy PBS možno pridať podľa potreby na resuspendovanie).

d) Preneste ťažkú ​​suspenziu do 1,5 ml centrifugačnej skúmavky a umiestnite ju do centrifúgy. Centrifugujte pri 4 stupňoch a 12 000 ot./min. počas 5 minút; Odoberte supernatant.

e) Supernatant je bohatý na exozómy a môže sa použiť na nasledujúce experimenty. Môže byť tiež zabalený a uskladnený pri teplote -80 pre budúce použitie.

1. Tento produkt je možné dlhodobo stabilne skladovať pri izbovej teplote. Pred použitím dobre pretrepte a premiešajte.

2. Tento produkt sa môže použiť ako doplnok ku koncentrácii bunkového supernatantu v G4113 exozómovej separačnej chromatografickej kolóne (bunkový supernatant).

3. Počas experimentu noste laboratórne oblečenie a jednorazové rukavice, aby ste predišli kontaminácii a zaistili bezpečnosť.

Len na výskumné účely!

Populárne Tagy: roztok koncentrácie exozómov, výrobcovia, dodávatelia, továreň v Číne