Súprava fluorescenčného testu lipidových kvapiek

 

Názov produktu	Cat. Nie	Špec.
Súprava fluorescenčného testu lipidových kvapiek	G1905-100T	100 T

 

 

Lipidové kvapôčky sú špecializované organely na ukladanie lipidov v bunkách, ktoré môžu regulovať ukladanie a hydrolýzu neutrálnych lipidov v bunkách a poskytujú bunkám dynamickú energetickú rovnováhu. Okrem toho sú lipidové kvapôčky schopné pohybovať sa pozdĺž cytoskeletu a interagovať s inými organelami, čo hrá dôležitú úlohu pri regulácii prenosu signálu. Abnormálna akumulácia kvapôčok bunkových lipidov sa vyskytuje pri niekoľkých typoch metabolických ochorení, ako je obezita, stukovatenie pečene, kardiovaskulárne ochorenia a patologické stavy.

Súprava lipidových kvapiek Fluorescence Assay Kit je založená na BODIPY 493/503, čo je lipofilná fluorescenčná sonda schopná lokalizácie v polárnych lipidoch a môže sa použiť na kalibráciu obsahu neutrálnych lipidov v bunkách a tkanivách. Táto súprava bola optimalizovaná a odladená našimi R&D team, a má viacero výhod, ako je jednoduché použitie, stabilný výkon a dobrá reprodukovateľnosť atď. Čím vyšší je obsah intracelulárnych lipidov, tým silnejší intenzita vytvorenej fluorescencie, ktorá môže byť detekovaná fluorescenčným mikroskopom a prietokovým cytometrom. Okrem toho táto súprava navyše poskytuje kyselinu olejovú ako induktor syntézy a skladovania triglyceridov, ktorú možno použiť na indukciu pozitívnej kontroly.

 

 

Loď so suchým ľadom; Skladujte pri teplote -20 stupňov mimo dosahu svetla po dobu 6 mesiacov.

 

 

Číslo komponentu	Komponent	G1904-100T
G1905-1	Sonda na testovanie lipidových kvapiek (2 mM)	100 μL
G1905-2	Testovací pufor na kvapôčky lipidov	100 ml
G1905-3	Pozitívny induktor (500 mM)	50 μL
manuál		1 ks

 

Poznámka: Vyššie uvedené reakčné časy sú testované pre systém 6-jamkových doštičiek.

 

 

Poznámka: Ako príklad si vezmite bunky adherujúce na 6-jamkovú platňu, suspenzné bunky je potrebné centrifugovať pri každej výmene kvapaliny; Vzorky tkaniva priamo odkazujú na kroky farbenia a označovania a celkový objem použitých činidiel sa upravuje podľa situácie; V prípade potreby je možné vzorky vopred upevniť, vyhnite sa však perforácii vzoriek.

1. Príprava pracovného roztoku na test lipidových kvapiek a pracovného roztoku na indukciu lipidových kvapiek:

1.1. Vezmite vhodné množstvo sondy na analýzu lipidových kvapiek (2 mM) a pufra na analýzu lipidových kvapiek, dôkladne premiešajte v pomere 1 : 500-2000 a pripravte pracovný roztok na analýzu lipidových kvapiek;

1.2. Vezmite primerané množstvo pozitívneho induktora (500 mM) a použite kultivačné médium zodpovedajúcich testovacích buniek na jeho zriedenie na 400-1000 uM a pripravte pracovný roztok na indukciu lipidových kvapiek na náhradné použitie (táto koncentrácia je referenčná rozsah a možno ho vhodne upraviť podľa povahy buniek alebo iných okolností).

2. Pozitívna kontrolná skupina a medikamentózna a iná liečba (6-adherentné bunky na jamkovej platničke, napríklad suspenzia buniek pri každej výmene kvapaliny, vykonajte centrifugáciu):

2.1. Bunky sa podľa potreby predpestujú na 6-jamkových doštičkách (s alebo bez preliezačky v závislosti od testu a vybavenia);

2.2. Odstráňte pôvodné bunkové kultivačné médium a dvakrát premyte PBS alebo inými puframi;

2.2.1. Experimentálna skupina: bunky, ktoré sa majú testovať, sa podrobia stimulácii liekom alebo inej relevantnej liečbe a požadovaný inkubačný čas si nastavíte sami;

2.2.2. Pozitívna kontrolná skupina: 1 ml pracovného roztoku na indukciu lipidových kvapôčok sa pridá do platne s jamkami, ktorá sa umiestni do inkubátora na inkubáciu cez noc;

2.3. Na konci inkubácie prejdite na krok 3 pre označenie škvŕn.

3. Značka farbenia lipidových kvapiek:

3.1. Odstráňte celogénne médium a premyte 2-3-krát PBS alebo inými puframi;

3.2. Odstráňte premývací tlmivý roztok, pridajte 1 ml pracovného roztoku pre lipidový kvapôčkový test a premiešajte za jemného pretrepávania;

3.3. Inkubujte 15 minút v CO2 inkubátore chránenom pred svetlom;

3.4. Po inkubácii ho dvakrát premyte PBS alebo inými tlmivými roztokmi a možno ho ďalej farbiť jadrami a inými operáciami alebo detegovať pomocou vhodného zariadenia podľa experimentálnych potrieb;

4. Detekcia lipidových kvapiek:

4.1. Vzorka po inkubácii a premytí v 3.4 sa analyzuje pomocou vhodnej metódy a prístrojového vybavenia, označí sa zelenou fluorescenciou, EX/EM 493/503 nm a niektoré príklady inštrumentálnej detekcie sú uvedené nižšie;

4.1.1. Priamo alebo pomocou tesniaceho roztoku na zhášanie fluorescencie (položka č. G1401) sa film zataví a potom sa umiestni pod fluorescenčný mikroskop na detekciu a analýzu.

4.1.2. Po štiepení a resuspendovaní pomocou tryptického štiepenia (suspenzné bunky sa nepoužívajú) sa bunky detegujú a analyzujú pomocou prietokovej cytometrie.

 

 

1. Vzhľadom na rôzne typy a vlastnosti buniek je možné koncentráciu pozitívnych induktorov a sond a inkubačný čas vhodne upraviť podľa potrieb experimentu.

2. Vzorky by sa mali vyhýbať kontaktu s organickými rozpúšťadlami alebo inými zložkami, ktoré ovplyvňujú lipidy, aby sa zabránilo narušeniu presnosti testu.

3. Fluorescenčné farbivá podliehajú zhášaniu a proces by mal byť chránený pred svetlom.

4. Pre vaše zdravie a bezpečnosť noste počas prevádzky laboratórny plášť a rukavice.

 

Len na výskumné účely!

 

 

Populárne Tagy: Súprava na fluorescenčný test lipidových kvapôčok, Čína výrobcovia, dodávatelia, továreň na fluorescenčné testy lipidových kvapiek