MagBind metylzlato DNA hydrogensiričitan konverzia súprava

 

Názov produktu	Kat.č.	Špec.
MagBind metylzlato DNA hydrogensiričitan konverzia súprava	G3639-50T	50 T

 

 

Epigenetika je odvetvie genetiky, ktoré študuje dedičné zmeny v génovej expresii a regulácii bez zmeny nukleotidovej sekvencie génov. Medzi nimi je metylácia DNA najskôr objaveným a jedným z najhlbšie študovaných epigenetických regulačných mechanizmov. U mnohých zvierat a rastlín je metylácia DNA založená na S-adenosylmetioníne ako metylovom donore, za katalýzy metyltransferázy sa piata uhlíková poloha cytozínového kruhu kovalentne viaže na metylovú skupinu.

Metylácia DNA je prirodzene sa vyskytujúca udalosť u prokaryotov a eukaryotov. U prokaryotov metylácia DNA chráni hostiteľskú DNA pred štiepením reštrikčnými endonukleázami, ktoré môžu eliminovať exogénnu DNA. U vyšších eukaryotov hrá metylácia DNA dôležitú úlohu pri regulácii génovej expresie.

Produkt používa bisulfit na ošetrenie metylovanej DNA a premieňa nemetylovaný cytozín na uracil, zatiaľ čo metylovaný cytozín zostáva nezmenený, celý proces je možné dokončiť do 4 hodín a účinnosť konverzie môže dosiahnuť viac ako 99%. Súprava zároveň využíva metódu odsírenia a regenerácie DNA na magnetických guľôčkach, ktorá dokáže efektívne zlepšiť regeneračné množstvo transformovanej DNA a celý priebeh operácie je veľmi jednoduchý. Transformovaná DNA môže byť použitá na PCR amplifikáciu a následnú analýzu, vrátane štiepenia reštrikčnými endonukleázami, sekvenovania, mikročipu a tak ďalej.

 

 

Dodávané a skladované pri izbovej teplote; platnosť 12 mesiacov.

 

 

Číslo komponentu	Komponent	G3639-50T
G3639-1	CT konverzné činidlo	10 krát / trubica × 5
G3639-2	Buffer BM	1,5 ml
G3639-3	Vyrovnávacia pamäť GB	10 ml
G3639-4	Buffer DB	3,6 ml (8,4 ml bezvodého etanolu pridaného pred použitím)
G3639-5	Vyrovnávacia pamäť PW	24 ml (56 ml bezvodého etanolu pridaného pred použitím)
G3639-6	SweMag korálky	1 ml
G3639-7	Voda bez nukleázy	10 ml
manuál		Jedna kópia

 

 

1. Pred použitím pridajte 280 μl tlmivého roztoku BM a 910 μl vody bez nukleázy do CT konverzného činidla, potom vortexujte, aby sa rozpustilo a skladujte pri -20 stupňoch.

2. Pred použitím pridajte 8,4 ml bezvodého etanolu do pufra DB, pridajte 56 ml bezvodého alkoholu do pufra PW, dobre premiešajte a použite.

3. Magnetické stojany a izopropanol sú potrebné, ale nie sú súčasťou tejto súpravy.

 

 

1. Pridajte 20 μl genómovej DNA (celkové množstvo je 500 ng-2000 ng, a ak je objem menší ako 20 μl, môže sa doplniť vodou bez nukleázy) do skúmavky PCR. Pridajte 130 μl CT konverzného činidla a jemne premiešajte pomocou pipety.

2. Preneste zmes z prvého kroku do prístroja PCR a nastavte ju na 98 stupňov na 10 minút a 64 stupňov na 2,5 hodiny. Po prevádzke sa výrobok skladuje pri 4 stupňoch.

3. Pridajte 150 μl tlmivého roztoku GB a 130 μl izopropanolu do vyššie uvedených produktov, pomocou pipety dobre premiešajte, potom pridajte 15 μl SweMag Beads (pred použitím vortexujte, aby sa rovnomerne rozptýlili) a pomocou pipety fúkajte, kým sa guľôčky rovnomerne nerozptýlia. .

4. Nechajte stáť pri izbovej teplote 10 min. Počas tejto doby 3 až 4-krát rovnomerne premiešajte pomocou pipety, aby sa magnetické guľôčky udržali rovnomerne rozptýlené.

5. Odstredivkovú skúmavku presuňte na magnetický stojan a nechajte 30 s odstáť, aby sa magnetické guľôčky adsorbovali na stenu skúmavky. Keď je číry, zlikvidujte supernatant (neodsávajte magnetické guľôčky, aby ste predišli ovplyvneniu účinnosti extrakcie).

6. Vyberte skúmavku od centrifúgy z magnetického stojana, pridajte 400 μl pufra PW, prefukujte pipetou, kým sa magnetické guľôčky nerozptýlia rovnomerne. Potom premiestnite skúmavku odstredivky na magnetický stojan a nechajte ju stáť 30 s, aby sa magnetické guľôčky adsorbovali na stenu skúmavky. Keď je číry, zlikvidujte supernatant (neodsávajte magnetické guľôčky, aby ste predišli ovplyvneniu účinnosti extrakcie).

7. Skúmavku odstredivky vyberte z magnetického stojana, pridajte 200 μl tlmivého roztoku DB, prefúknite ju pipetou, kým sa magnetické guľôčky rovnomerne nerozptýlia, nechajte 15 minút stáť pri izbovej teplote a počas tejto periódy premiešajte každých 3 až 5 minút (tlmivý roztok DB čas spracovania by nemal byť príliš dlhý, aby sa predišlo nadmernej fragmentácii genómovej DNA). Odstredivkovú skúmavku premiestnite na magnetický stojan a nechajte stáť 30 sekúnd, aby sa magnetické guľôčky adsorbovali na stenu skúmavky, a po vyčistení supernatant zlikvidujte (aby ste predišli ovplyvneniu účinnosti extrakcie, neodsávajte magnetické guľôčky von).

8. Skúmavku odstredivky vyberte z magnetického stojana, pridajte 400 μl pufra PW, prefúknite ju pipetou, kým sa magnetické guľôčky nerozptýlia rovnomerne. Potom premiestnite skúmavku odstredivky na magnetický stojan a nechajte ju stáť 30 s, aby sa magnetické guľôčky adsorbovali na stenu skúmavky. Keď je číry, zlikvidujte supernatant (neodsávajte magnetické guľôčky, aby ste predišli ovplyvneniu účinnosti extrakcie).

9. Opakujte krok 8.

10. Otvorte veko centrifugačnej skúmavky, nechajte ho pri izbovej teplote 5~10 minút alebo pri 65 stupňoch 3~5 minút, aby sa etanol úplne odparil (magnetické guľôčky príliš nevysušujte, aby sa neovplyvnil výťažok nukleovej kyseliny).

11. Vyberte centrifugačnú skúmavku z magnetického stojana, pridajte 30~50 μl vody bez nukleázy do centrifugačnej skúmavky, fúkajte, kým sa magnetické guľôčky rovnomerne nerozptýlia pomocou pipety, nechajte stáť pri izbovej teplote 5 minút.

12. Presuňte odstredivku do magnetického stojana, kým sa magnetické guľôčky úplne neadsorbujú, a absorbujte supernatant do novej odstredivkovej skúmavky, aby ste získali konvertovaný roztok DNA.

 

 

1. Pred použitím si pozorne prečítajte návod na použitie.

2. Magnetické guľôčky sa ľahko zrážajú a pred použitím ich treba dôkladne pretrepať alebo premiešať.

3. Čas spracovania Buffer DB by nemal byť príliš dlhý, je ľahké spôsobiť nadmernú fragmentáciu DNA a ovplyvniť následné experimenty.

4. Pred elúciou by sa mal etanol úplne odpariť, aby sa predišlo vplyvu zvyškového etanolu na následné experimenty.

5. Magnetické guľôčky nesušte dlho, pretože to môže spôsobiť nevratné zhlukovanie guľôčok.

6. Získaná DNA by sa mala skladovať pri teplote -20, aby sa zabránilo opakovanému zmrazovaniu a rozmrazovaniu.

7. Pre vašu bezpečnosť a zdravie noste laboratórny plášť a jednorazové rukavice.

 

Len na výskumné účely!

 

 

Populárne Tagy: magbind methylgold dna bisulfitová konverzná sada, Čína magbind methylgold dna bisulfitová konverzná sada výrobcovia, dodávatelia, továreň