Súprava DNA stolice

Táto súprava využíva vlastnosti reverzibilnej adsorpcie nukleových kyselín membrán zo sklenených vlákien, dokáže rýchlo a spoľahlivo izolovať vysokokvalitnú neporušenú genómovú DNA z 100-200 mg čerstvých alebo mrazených vzoriek stolice. V kombinácii s unikátnym systémom lyzačného pufra dokáže účinne eliminovať humínové kyseliny, polysacharidy, fenolové zlúčeniny a inhibítory enzýmov vo vzorkách stolice. Purifikovaná DNA je vhodná pre následné techniky molekulárnej biológie, ako je PCR, enzýmové štiepenie a hybridizácia.

Proteináza K a RNáza A boli transportované vo vlhkých ľadových obaloch a skladované pri -20 stupňoch; Ostatné reagencie sú prepravované pri izbovej teplote, skladované pri izbovej teplote, platnosť 12 mesiacov.

1. Vopred si pripravte 70 stupňový vodný kúpeľ alebo vykurovací blok.

2. Ak sa činidlo vyzráža, rozpustite ho pri 37 stupňoch a použite ho po ochladení na izbovú teplotu.

3. Pred použitím pridajte 30 ml izopropylalkoholu do pufra SGB, pridajte 18 ml bezvodého etanolu do pufra SGD a pridajte 49 ml bezvodého etanolu do pufra PW.

1. Odvážte 100-200 mg vzorky stolice v 2 ml centrifugačnej skúmavke a umiestnite skúmavku na ľad (ak je vzorka tekutá, napipetujte 200 µl do centrifugačnej skúmavky);

2. Pridajte 600 μl pufra SLA, 15 μl proteinázy K a 0,25 g mlecích guľôčok (1 mm) do odstredivej skúmavky. Odporúčame použiť mlynček na tkanivo (KZ-III-F) na mletie (60 Hz, 4 stupne, beh 30 s, pauza 10 s, mletie 5-krát), kým sa homogenizuje, alebo na prerušované pretrepávanie 1 minútu použite vortex;

3. Inkubujte pri teplote 70 stupňov počas 15 minút. Vortexujte vzorku 2-3-krát počas inkubácie (ak je DNA izolovaná z grampozitívnych baktérií, inkubačná teplota sa môže zvýšiť na 95 stupňov);

4. Centrifugujte pri izbovej teplote pri 12, 000 otáčkach za minútu (~13 400 x g) počas 10 minút, napipetujte supernatant do novej 1,5 ml centrifugačnej skúmavky, pričom dávajte pozor, aby ste neodsali zrazeninu;

5. Pridajte 10 μl RNázy A do supernatantu získaného v predchádzajúcom kroku, vzorku dôkladne premiešajte vortxovaním, inkubujte pri izbovej teplote 5 minút, potom pridajte 0,3-násobok objemu supernatantu pufra SLB do centrifugačnej skúmavky , vzorka sa dôkladne premieša vírením a ľadovým kúpeľom počas 5 minút;

6. Centrifugujte pri izbovej teplote pri 12, 000 otáčkach za minútu (~13 400 x g) počas 5 minút, napipetujte supernatant do novej 1,5 ml centrifugačnej skúmavky, pričom dávajte pozor, aby ste neodsali zrazeninu;

7. Do centrifugačnej skúmavky pridajte rovnaký objem pufra SGB (pred použitím sa uistite, že bol pridaný izopropylalkohol) a pomocou pipety prefúknite a dobre premiešajte (môže dôjsť k zrážaniu);

8. Preneste celú zmes z predchádzajúceho kroku do kolóny DNA Spin Column (množstvo každého prídavku by nemalo presiahnuť 600 µl, ak je možné v dávkach pridať viac ako 600 µl), centrifugujte pri izbovej teplote pri 12,{{4} } otáčky za minútu (~13 400 × g) počas 1 minúty. Filtrát zlikvidujte a vložte DNA Spin Column do zbernej skúmavky;

9. Pridajte 500 μl tlmivého roztoku SGD (pred použitím sa uistite, že bol pridaný bezvodý etanol) do kolóny DNA Spin Column, centrifugujte pri izbovej teplote pri 12,000 otáčkach za minútu (~13 400 × g) počas 1 minúty. Zlikvidujte filtrát a vložte kolónu DNA Spin do skúmavky na odber;

10. Pridajte 600 μl tlmivého roztoku PW do kolóny DNA Spin (pred použitím sa uistite, že bol pridaný bezvodý etanol, pridajte tlmivý roztok PW pozdĺž steny skúmavky, aby ste pomohli vypláchnuť zvyškovú soľ zo steny) a centrifugujte pri izbovej teplote pri 12 ,000 ot./min (~13 400 × g) počas 1 min. Filtrát zlikvidujte a vložte DNA Spin Column do zbernej skúmavky;

11. Opakujte krok 10;

12. Znova umiestnite rotačnú kolónu DNA do odberovej skúmavky, centrifugujte pri izbovej teplote pri 12,000 otáčkach za minútu (~13 400 × g) počas 2 minút, vyberte rotačnú kolónu DNA a umiestnite ju do novej 1,5 ml centrifúgy rúrka;

13. Otvorte veko kolóny DNA Spin Column a umiestnite ju pri izbovej teplote na 3-5 min, aby sa zvyškový etanol úplne vyparil;

14. Pridajte 50-100 μL pufra TE alebo vody bez nukleázy do stredu membrány a umiestnite ju pri izbovej teplote na 2 minúty. Centrifugujte pri izbovej teplote pri 12,000 otáčkach za minútu počas 2 minút a odoberte roztok DNA. Ak potrebujete vyššiu koncentráciu DNA, získaný roztok je možné znova pridať do kolóny DNA Spin Column, umiestniť ju na 2 minúty pri izbovej teplote a 2 minúty odstreďovať pri izbovej teplote pri 12,000 otáčkach za minútu, pričom sa DNA opäť eluuje .

1. Pred prevádzkou si pozorne prečítajte tento návod k produktu.

2. Počas prevádzky noste laboratórny plášť a jednorazové rukavice.

3. Ak je vzorka stolice suchá, zvýšte množstvo tlmivého roztoku SLA na 1 ml alebo znížte hmotnosť vzorky niekoľkokrát hore dnom a po pridaní tlmivého roztoku SLA nechajte stáť pri izbovej teplote 3-5 min, inak bude ovplyvnený výťažok DNA.

4. Ak potrebujete inkubáciu pri 95 stupňoch, otvorte veko centrifugačnej skúmavky raz, keď teplota dosiahne 95 stupňov, vypustite plyn z centrifugačnej skúmavky a potom pevne zatvorte veko centrifugačnej skúmavky, aby ste zabránili expanzii plynu v centrifugačnej skúmavke a prasknutiu veka. čo má za následok striekanie vzoriek stolice.

5. Niektoré činidlá sú prchavé alebo oxidované, treba sa vyhnúť dlhodobému vystaveniu vzduchu, činidlo by sa malo po použití včas uzavrieť.

Len na výskumné účely!

Populárne Tagy: stool dna kit, Čína stool dna kit výrobcovia, dodávatelia, továreň