V experimentoch Western Blot (WB) sa odizolovanie protilátok používa hlavne v nasledujúcich scenároch v závislosti od experimentálnych potrieb a vlastností protilátok:
1. Zistenie viacerých cieľov na rovnakej membráne
Ak je množstvo vzorky obmedzené alebo sú potrebné konzistentné detekčné podmienky, odstránenie umožňuje opätovné použitie membrány. Príklady zahŕňajú:
1) sekvenčná detekcia rôznych cieľov:Najskôr detekujte proteíny s nízkym výskytom, potom odložte a detekujte s vysokým výpadkom, aby ste predišli neúplnému stripovaniu.
2) Validácia viacerých značiek:Napríklad detekcia proteínov v rovnakej signálnej dráhe (napr. Fosforylované a celkové proteíny). Inkubujte sa s fosfo-protilátkami ako najskôr, potom strip a sondu pre celkový proteín, aby sa zabezpečila porovnateľnosť údajov.
2. Optimalizácia inkubácie protilátky alebo overovanie špecifickosti
1) vylúčiť nešpecifickú väzbu:Ak sa objavia neočakávané pásy, stripovanie a prepúšťanie inou protilátkou môžu pomôcť potvrdiť krížovú reaktivitu.
2) Upravte poradie protilátok:Zistite najprv slabé alebo ľahko odizolované protilátky, po ktorých nasledujú silnejšie.
3. Šetrenie vzorky a času
1) Obmedzená dostupnosť vzoriek:V prípade vzácnych alebo drahých vzoriek (napr. Klinické alebo primárne bunky) opätovné použitie membrány znižuje použitie vzorky.
2) Rýchlejší experimentálny obrat:Odizolovanie je rýchlejšie ako opakovanie gélu a prenosu, ideálne počas optimalizácie.
4. Špeciálne experimentálne potreby
1) Korekcia riadenia načítania:Detegovať cieľové a referenčné proteíny postupne na rovnakej membráne, aby sa zabránilo variácii šarže.
2) Nastavenie blokovania:Ak BSA zhoršuje účinnosť odizolovania, prepnite na rýchle blokátor alebo odstredené mlieko bez bielkovín ServiceBio, aby ste zlepšili výsledky.
Poznámky:
Limit stripovania:Membrána sa zvyčajne môže zbavovať 3–4 krát; Nadmerné stripovanie môže mať za následok stratu bielkovín.
Kontrola efektívnosti:Vždy overte odstránenie protilátok detekciou ECL, aby ste predišli falošným pozitívom.
Stručne povedané, odizolovanie protilátok je ideálne na detekciu viacerých cieľov, validáciu výsledkov a zachovanie vzorky. Vyberte podmienky na odstránenie na základe experimentu a vlastností protilátok.
OdporúčameServiceBio protilátkový tlmivý roztokPre bezpečné a účinné odstránenie primárnych a sekundárnych protilátok z PVDF alebo NC membrán:
G2078(Pravidelné): Pre slabé signály alebo protilátky s nízkou afinitou.
G2079(Vylepšené): Pre silné signály alebo vysoko afinitné protilátky.
